Вся информация на сайте опубликована в ознакомительных целях и не является руководством к действию без консультации врача.
Исследование налетов
Материал из зева больного берут стерильным ватным тампоном. Существует несколько методов обнаружения палочки дифтерии:
а) исследование мазка;
б) ускоренный метод;
в) посев на специальные среды.
Мазок готовят из материала, взятого тампоном из зева или носа больного. Тампон размазывают на прокаленные предметные стекла, фиксируют их над пламенем горелки и окрашивают метиленовой синью Леффлера или краской Штольтенберга в течение 2—3 минут, после чего рассматривают под микроскопом. Отрицательный ответ не гарантирует отсутствия палочек дифтерии; однако если палочки обнаруживаются, диагноз устанавливается на сутки раньше, что имеет большое значение для своевременной диагностики и лечения.
Рецепты красок.
1. Краска Штольтенберга: метиленгрюна 2,5 г, толуидиновой сини 2,5 г, крепкой уксусной кислоты 100 мл. Краску окисляют прибавлением 20 капель насыщенного раствора двухромовокислого калия с одновременным растиранием, а затем объем ее доводят до 1 л, добавляя дистиллированную воду.
2. Щелочная метиленовая синь Леффлера: дистиллированной воды 100 мл, 10% раствора едкого кали 2 капли, 7% раствора метиленовой сини 30 мл (или метиленовой сини 3 г), спирта 96% 100 мл, 1% раствора едкого кали 1 мл.
Ускоренный метод дает возможность обнаружить дифтерийные палочки через 4—5 часов.
Берут стерильный ватный тампон, смоченный в лошадиной сыворотке, и вставляют в пробирку (сыворотку для ускорения свертывания помещают на 30 минут в водяную баню при температуре 80—90°). Затем тампоном берут мазок из зева и ставят в термостат при температуре 37° на 4—5 часов. Мазок на стекле делают как обычно, окрашивают одномоментно краской Леффлера, Штольтенберга или же двухмоментно по методу Нейссера и микроскопируют. При этом требуется известный опыт, чтобы обнаружить характерные зерна на концах дифтерийной палочки. При получении отрицательного результата этим же тампоном производят посев на среды.
Окрашивают по методу Нейссера дважды: краской Нейссера и раствором Люголя в течение одной минуты, после чего промывают водой и затем докрашивают хризоидином или везувином, или бисмаркбрауном в течение 1—3 минут и снова промывают водой.
Состав красок.
1. Краска Нейссера: метиленовой сини 0,1 г, спирта 96° 2 мл, ледяной уксусной кислоты 5 мл, дистиллированной воды 100 мл.
2. Раствор хризоидина, везувина или бисмаркбрауна: 1 г, дистиллированной воды 300 мл. Краску растворяют при подогревании воды и фильтруют.
Посев на среды. После взятия мазка из зева больного производят посев на сыворотку Леффлера или на свернутую кровяную сыворотку, которую наливают в пробирки. Тампон втирают в питательную среду всеми сторонами. Если посев на среды из-за их отсутствия в момент взятия материала из зева сразу не удается, рекомендуется материал брать тампонами, увлажненными физиологическим раствором или 15% раствором глицерина в физиологическом растворе, и закрывать в стерильной пробирке. Промежуток времени между взятием материала и его посевом не должен превышать 5—6 часов.
Материал рекомендуется брать сразу из зева и из носа разными тампонами и в разные пробирки. Посев ставят в термостат при температуре 37°. Через 18—20 часов пробирки извлекают, и тогда при наличии роста дифтерийных палочек на поверхности питательной среды видны многочисленные бисерные, близко расположенные друг к другу колонии, или же поверхность посева имеет характерный шагреневый вид.
Приготовление мазка из выращенной чистой культуры. Берут петлей материал из выросшей колонии и вносят в каплю физиологического раствора на чистом предметном стекле, а затем делают тонкий мазок, который просушивают на воздухе, фиксируют над пламенем и окрашивают метиленовой синью Леффлера и краской Штольтенберга. Приготовляют два — три мазка. При наличии палочек дифтерии последние распределяются среди банальной флоры в виде скоплений, напоминающих войлок.
Палочки имеют различную форму. Они могут быть или заострены, или утолщены на концах, часто располагаются под углом друг к другу, на концах палочек имеются специфические для дифтерийных палочек темные зерна, представляющие собой запас питательного вещества. Эти зерна лучше видны при окрашивании краской Нейссера; при этом способе палочка окрашивается в коричневый цвет, а зерна— в темно-синий. К окраске по Нейссеру прибегают в сомнительных случаях.
Переболевшие дифтерией и контактировавшие с ними могут длительный срок оставаться бациллоносителями, представляя известную эпидемиологическую опасность. Для обнаружения бациллоносителей пользуются методом посева материала из зева, носа, но в термостате материал держат 48 часов для лучшего прорастания палочек.