Бактериоскопическое исследование мокроты
Для изготовления препарата кусочек мокроты прокаленной иглой переносят на предметное стекло, на которое накладывают такое же стекло. После равномерного растирания мокроты между стеклами последние разнимают скольжением. Оба препарата высушивают и фиксируют троекратным проведением мазками вверх над пламенем горелки. Окраска производится:
а) фуксином;
б) по Граму;
в) по Цилю — Нильсену.
При окраске фуксином пипеткой из капельницы наливают на фиксированный мазок водный раствор 1 : 10 карболового фуксина, оставляют на 2—3 минуты, а затем обмывают струей воды. Осторожно высушивают и для этой же цели кладут между двумя листками фильтровальной бумаги.
При окраске по Граму на фиксированный препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги несколько меньшего размера, чем стекло, и наливают раствор карболового генцианвиолета. Фильтровальная бумага предохраняет мазок от осадка краски. Через 2—3 минуты бумагу снимают пинцетом, краску сливают и на мазок для протравы на 1—2 минуты наливают раствор Люголя, который затем сливают. Препарат опускают в стаканчик с 96° спиртом и взбалтывают в течение нескольких секунд, после чего промывают водой. Если обесцвечивание будет неполным, процедуру со спиртом повторяют до тех пор, пока препарат не станет серого цвета, после чего его окрашивают фуксином в течение 1—2 минут, промывают водой и высушивают. Путем такой окраски устанавливают, что одни бактерии окрашиваются в синий цвет, а другие — в розовый. Бактерии, окрашивающиеся в синий цвет, называются грамположительными, а окрашивающиеся в розовый цвет — грамотрицательными.
По Граму окрашиваются следующие бактерии:
1) пневмококк, или диплококк Френкеля, — капсульные диплококки, заостренные снаружи и закругленные изнутри, напоминающие пламя свечи и имеющие светлый ободок (капсула); пневмококк грамположителен, обнаруживается главным образом в мокроте больных крупозной пневмонией, но может встречаться и при очаговой пневмонии;
2) пневмобактерии, или диплобактерии Фридлендера, — палочки с закругленными концами, заключенные в капсулы, грамотрицательны, встречаются при крупозной пневмонии. Грамположительны стафилококки, стрептококки, бациллы Пфейффера—овальные палочки, спирохеты, веретенообразные палочки.
Окраска микобактерий туберкулеза производится по Цилю — Нильсену. Микобактерии туберкулеза кислото- и спиртоустойчивы, поэтому требуют специальных методов окраски. Метод Циля—Нильсена состоит в следующем. На высушенный и зафиксированный мазок кладут кусочек фильтровальной бумаги не шире предметного стекла, наливают на ее поверхность неразведенный карболовый фуксин и подогревают над пламенем спиртовки до образования паров. Во время подогревания следят за тем, чтобы краска не высохла, для чего периодически подливают ее; после этого препарат оставляют на 2—3 минуты, пока мазок несколько остынет. Сливают бумажку с фуксином, ополаскивают мазок водой и опускают на одну минуту в стаканчик с 5% раствором серной кислоты. Тщательно промывают водой, докрашивают раствором метиленовой сини (1 : 1000) в течение 2—3 минут, снова промывают и высуживают. Окрашенный препарат рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой; микобактерии в нем красного цвета, тонкие, иногда извитые. Они бывают единичными или сплошь покрывают все поле зрения. Можно наблюдать микобактерии, фагоцитированные лейкоцитами. Все остальное в мазке имеет синий цвет. Следует готовить сразу 3—4 мазка из одной из той же мокроты. Кроме мазков обычной мокроты, исследованию подвергают обогащенную мокроту с повышенным содержанием микобактерий туберкулеза. Обогащение осуществляется:
а) обработкой антиформином, который разрушает в мокроте все элементы, кроме микобактерий туберкулеза;
б) методом всплывания (флотации);
в) посевом мокроты на специальные среды;
г) заражением животных;
д) исследованием желудочного сока больных.
Уничтожение мокроты после использования обязательно. Ее уничтожают путем автоклавирования или прибавления к ней различных дезинфицирующих веществ.
Вся информация на сайте опубликована в ознакомительных целях и не является руководством к действию без консультации врача.